粗純的作用是分離差異較大的物質，如固液分離、胞內或胞外物質分離，減少下游純化工藝的負擔。以大腸桿菌或酵母為表達平臺的重組蛋白粗純工藝包括培養(yǎng)上清、胞內可溶物或包涵體的分離，通常選擇離心和破碎的方式實現(xiàn)。

由于小試與生產規(guī)模不同，耀海研發(fā)實驗室和車間配備的離心和均質設備也有所差異，而離心和均質參數(shù)的轉換尤其重要，很大程度上影響產品的質量和收率。因此小試發(fā)酵工藝放大至生產規(guī)模時，耀海團隊會判斷設備差異對工藝過程及產物的影響。耀海建議在小試與GMP生產的轉移過程中，增加中試放大的環(huán)節(jié)，以調整工藝參數(shù)使其高度契合生產規(guī)模。

耀海生物具有超十年微生物表達體系重組蛋白和質粒DNA生產及服務經(jīng)驗，針對不同性能/品牌的離心和均質設備積累了豐富的工藝放大經(jīng)驗。我們可識別并控制關鍵參數(shù)，成功實現(xiàn)粗純工藝的放大生產，有效去除雜質的同時保證目的蛋白的收率。

服務詳情

粗純工藝放大前后的差異

粗純工藝放大經(jīng)驗分享

離心的目的是實現(xiàn)固液分離，應用場景包括菌體或上清液收集、菌體碎片去除和包涵體收集等，關鍵參數(shù)包括轉速、進料速度和排渣時間。離心不達標會導致固液分離效果不佳，可能會降低產物收率或增加下游純化負擔。

高壓均質機可用于破碎細胞，釋放胞內產物，關鍵參數(shù)包括流速、均質壓力和次數(shù)，控制指標為菌體破碎程度。菌體破碎不充分會降低產物收率；破碎過度會導致菌體碎片無法去除，釋放過多雜質、增加純化壓力。

耀海團隊基于豐富的產物粗純服務經(jīng)驗，總結了離心和高壓均質工藝轉移過程中的常見問題和解決方法：